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两栖动物酒精标本DAN模板的快速提取
A Method of DNA Extraction from Alcohol-Preserved Tissue of Atympanophrys
莫邦辉1,袁水全1,2,郑渝池1,郭骁才1,曾晓茂1
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DOI:
作者单位:1.中国科学院成都生物研究所,成都610041;2.成都市第一农业科学研究所,成都610072
中文关键字:酒精固定组织;DNA提取;测序
英文关键字:alcohol-preserved sample; DNA extraction; sequence
中文摘要:本文以中国角蟾属4个种的蝌蚪酒精固定标本为材料,取尾部肌肉组织0.1g,滤纸吸干组织块表面的酒精,在研钵中用剪刀剪碎,液氮研磨成粉(必要时可加少量石英砂),转入1.5ml离心管,加入0.1ml提取缓冲液(0.5% SDS, 10 mmol/L Tris-HCl, 100 mmol/L EDTA, pH8.0)37温浴h5000 r/min离心10 min,取上清转入另一1.5ml离心管,氯仿/异戊醇(24:1)抽提两次,上清液加2倍体积预冷(-20)的无水乙醇沉淀DNA12 000 r/min离心3min,无菌条件下风干后,50µl TE溶解,4保存备用。以通用引物PCR扩增12S rRNA16S rRNA基因部分片段并测序。本文不采用蛋白酶K提取酒精保存标本的DNA模板,全部流程只需3个小时,可同时提取数十个乃至数百个标本,并且所提取的DNA模板适合短片段PCR扩增。
英文摘要:Alcohol-preserved tadpole samples of 4 species of Atympanophrys were studied. 0.1 gram tissue sample taking from tadpole tail muscle was cut into small particles and ground to fine powder with pestle in liquid nitrogen. The powder was allotted into Eppendorf tube and added extraction buffer (10 mmol/L Tris-HCl, 100 mmol/L EDTA, pH8.0, 0.5% SDS). Then the tube was rocked gently and incubated at 37 for 12 hours. After incubation, the DNA was extracted with chloroform/isomylol (24/1) and centrifuged at 5000 rpm for 10 minutes. The top water phase was removed to a new tube and the extraction was repeated once again. The DNA in the top water phase was precipitated in -30 ice ethanol and pelleted by centrifugation at 12000 rpm for 3 minutes. The supernatant was poured off and the pellet was dried in air. The DNA was dissolved in 50µl TE buffer. The authors used those total DNA as template to successfully amplify 12SrRNA, 16SrRNA of the mitochondria DNA by PCR.
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