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大熊猫FOXL2基因的克隆、序列分析及表达
Cloning, Sequence Analysis and Expression of the Giant Panda FOXL2 Gene
袁红英,杨东,王高超,谭帅,邹方东*
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DOI:
作者单位: (生物资源与生态环境教育部重点实验室,四川大学生命科学学院,成都610064)
中文关键字:大熊猫;FOXL2;基因克隆与表达;序列分析
英文关键字:giant panda; FOXL2; gene cloning and expression; sequences analysis
中文摘要:

从大熊猫基因组中克隆了FOXL2基因,并对其进行序列分析及原核表达和真核表达。将FOXL2编码区序列克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达出FOXL2重组蛋白。成功构建了真核表达载体FOXL2-pcDNA3.1/V5-His C,并通过脂质体介导转染HEK293细胞,Western blot检测FOXL2蛋白表达。SDS-PAGE分析表明,FOXL2重组蛋白在诱导4 h后表达量达到峰值,其大小约为58.9 kDaWestern blot分析结果显示重组蛋白能够被抗His单克隆抗体特异性识别。FOXL2基因的克隆及其表达为进一步进行FOXL2的活性检测以及应用研究奠定了基础。

英文摘要:

FOXL2 is a member of the large family of winged helix/forkhead transcription factors involved in ovarian development and function. Herein we cloned the FOXL2 from the giant panda genome. The FOXL2 was sequenced, analyzed and expressed in E .coli BL21 and in HEK293 cells. The ORF of FOXL2 was inserted into prokaryotic expression vector pET-32a (+) to constructed recombinant expression plasmid pET-32a(+)-FOXL2 and expressed in E.coli BL21 by IPTG induction. A recombinant eukaryotic expression vector FOXL2-pcDNA3.1/V5-His C was constructed, the recombinant plasmid was transfected into HEK293 cells with Lipofectamine 2000 and the fusion protein was identified by Western blot analysis. SDS-PAGE and Western blot analysis showed that the recombinant FOXL2 was highly expressed at 4 hours after IPTG induction and the expressed product of FOXL2 was about 58.9 kDa which was recognized by His monoclonal antibody. The results could be useful for further study of the bioactivity and application of FOXL2.

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