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中药材蛤蚧的特异性PCR鉴定
Authentication of Gecko by Allele-specific PCR
顾海丰1,2,3,夏云2,3, 徐永莉1,谷颖乐1,许尧4,李力1*,曾晓茂2*
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DOI:
作者单位:(1. 广西药用植物园, 南宁530023;2. 中国科学院成都生物研究所,成都610041;3. 中国科学院研究生院,北京100049;4. 郑州大学生物工程系,郑州450001)
中文关键字:特异性引物;蛤蚧及伪品;分子鉴定
英文关键字:allele-specific PCR; gecko and its adulterant; molecular identification
中文摘要:线粒体CytbCOI12SrRNA16SrRNA基因序列为基础,探讨特异性 PCR技术鉴定蛤蚧及伪品的可行性。本研究以所扩增的16COI序列为引物设计依据序列设计了1对位点特异性引物COISFCOISR,同时从GenBank上下载30条序列,设计了CytbSFCytbSR16S rRNASF16S rRNASR 12S rRNASF12S rRNASR另外3对位点特异性引物,因此共用4对位点特异性引物分别扩增蛤蚧及伪品实验样本。结果表明在复性温度为65时,4对引物都出现了理想的结果,即蛤蚧正品出现了扩增条带,而伪品没有扩增条带。同时对市售的蛤蚧商品进行了检测,在所供的7号标本中,有4号为蛤蚧正品,其余3号为蛤蚧伪品。本研究所设计的位点特异性引物可快捷、准确的鉴定蛤蚧及伪品,且在药检工作中具有极大的应用前景。
英文摘要:To explore the practicability of allele-specific PCR in identifying gecko, we designed a pair of primerCOISF, COISR based on 16 sequences. Meanwhile, we downloaded another 30 sequences from the GenBank to design other three pairs of primers CytbSF, CytbSR; 16S rRNASF, 16S rRNASR; 12S rRNASF, 12S rRNASR, respectively. At the annealing temperature 65℃, all the genuine gecko present electrophoretic bands, while the adulterants show no electrophoretic bands. Therefore, the four pairs of primers are effective in identifying gecko. Moreover, we test the primers using seven samples from market, the results showed that four of them is genuine, the rest are adulterants. In conclusion, the DNA barcode-specific PCR is effective for identifying gecko and its adulterant.
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