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藏酋猴微卫星富集文库的构建及微卫星分子标记的筛选
Construction of Microsatellite-enriched Library and Isolation of Microsatellite Markers in Macaca thibetana
贾小东1,2,张修月1,王红星3,王中凯1,尹湧华1,岳碧松1*
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DOI:
作者单位:1. 四川省濒危野生动物保护生物学重点实验室,四川大学生命科学学院,成都 610064;2. 绵阳师范学院资源环境工程学院,四川绵阳 621000;3. 四川省医学科学院•四川省人民医院 实验动物研究所,成都 610212
中文关键字:藏酋猴;富集文库;微卫星
英文关键字:Macaca thibetana; enriched library; microsatellite
中文摘要:通过磁珠富集法构建了藏酋猴AC重复和AAAG重复的微卫星富集文库,分离微卫星序列并对其进行分析。将藏酋猴基因组DNASau3AI酶切后纯化回收,连接特定接头。用生物素标记的探针与酶切片段杂交,捕获300~1000 bp片段,随后将获得的片段连接到pMD-19T载体上,转化至JM109中,成功构建藏酋猴微卫星富集文库。(AC)n富集文库和(AAAG)n富集文库的阳性克隆率分别为50%10%左右。根据测序得到的48个微卫星序列成功设计了24对引物,最终筛选出6个微卫星标记,这些标记将为藏酋猴的遗传多样性研究、圈养种群结构的分析和遗传图谱的构建等奠定一定的基础
英文摘要:Microsatellite-enriched libraries of AC-repeats and AAAG-repeats in Macaca thibetana were constructed using an enrichment method with biotin-labeled probes and streptavidin-coated magnetic beads. The ratios of positive clones containing (AC)n and (AAAG)n enriched libraries were approximately 50% and 10%, respectively. Total 48 microsatellite sequences were obtained by sequencing positive clones. According to sequencing results, 24 pairs of primers were designed, and of them 6 markers were optimized. The 6 microsatellite maker of M. thibetana obtained from this study would be significant in future study, such as population structure analyses, paternity testing, and genetic mapping.
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