刊期:双月刊
主管单位:四川省科学技术协会
主办单位:四川省动物学会/成都大熊猫繁育研究基金会/四川省野生动植物保护协会/四川大学
地址:四川省成都市武侯区望江路29号四川大学生命科学学院内
邮编:610065
电话:028-85410485; 15881112385
传真:028-85410485
E-Mail:scdwzz@vip.163.com & scdwzz001@163.com
刊号:ISSN 1000-7083
        CN 51-1193/Q
国内发行代号:
国际发行代号:
发行范围:国内外公开发布
定价:50元/册
定价:300元/年

您所在位置:首页->过刊浏览->2014年第33卷第2期

斑马鱼尿酸氧化酶基因的克隆与原核表达
Cloning and Prokaryotic Expression of Urate Acid Oxidase Gene of Zebrafish
匡红艳1,荣俊2*,朱莹莹2
点击:1339次 下载:13次
DOI:
作者单位:(1. 长江大学临床医学院,湖北荆州434100;2. 长江大学生命科学学院,湖北荆州434100)
中文关键字:斑马鱼;尿酸氧化酶;表达
英文关键字:zebrafish; urate acid oxidase; expression
中文摘要:目的  探讨斑马鱼尿酸氧化酶基因的克隆与原核表达的方法,研究重组斑马鱼尿酸氧化酶(ZUO)的理化性质与生物学功能。方法  PCR的方法克隆斑马鱼尿酸氧化酶基因,用pET28a质粒进行原核表达。结果  成功克隆了斑马鱼尿酸氧化酶基因并完成了测序鉴定,该基因在大肠杆菌表达系统中得到有效表达且具有体外氧化尿酸的生物学功能。目的蛋白为胞内可溶性蛋白,占可溶蛋白总量的50%左右。最佳诱导条件为27 16 h,粗酶最佳溶解pH9.16,在此缓冲液溶解条件下,粗酶比活性为1.94 U/mg。获得的重组ZUO产量达64.8 U/g湿菌,高于直接从动物肝脏组织萃取的尿酸氧化酶。结论  斑马鱼尿酸酶基因能在大肠杆菌表达系统中表达,其溶解pH比基因工程表达的重组猪尿酸氧化酶略低,对后续开发痛风治疗新药有利。
英文摘要:Objective  To investigate the method of the cloning and expression of zebrafish urate acid oxidase in prokaryote, and study the physical and chemical characters and biologic function of zebrafish urate acid oxidase. Methods  PCR was used to clone the urate acid oxidase gene of zebrafish, and pET28awas used as prokaryotic expression vector. Results  The zebrafish urate acid oxidase gene was cloned, sequenced and successfully expressed in Escherichia coli expression system. And the purified product was found to have the same biological function with oxidation urate acid in vitro. The goal product was soluble and account for 50% of the total soluble protein. The optimal inducing condition was27for 16 h, the optimal dissolving pH of the coarse enzyme was 9.16, and the activity ratio of the coarse-enzyme was 1.94 U/mg in the buffer. The output of the recombinant zebrafish urate acid oxidase was 64.8 U/g of bacterial wet weight, which was higher than that directly extracted from the animal livers. Conclusion  Zebrafish urate acid oxidase gene could express in E. coli expression system, and the dissolving pH was lower than that of porcin. It would be useful in the development of new medicine of gout treatment.
读者评论

      读者ID: 密码:   
我要评论:
国内统一连续出版物号:51-1193/Q |国际标准出版物号:1000-7083
主管单位:四川省科学技术协会  主办单位:四川省动物学会/成都大熊猫繁育研究基金会/四川省野生动植物保护协会/四川大学
开户银行:中国工商银行四川分行营业部东大支行(工行成都东大支行营业室)  帐户名:四川省动物学会  帐号:4402 2980 0900 0012 596
版权所有©2019四川动物》编辑部 蜀ICP备08107403号-3
您是本站第7673739名访问者

川公网安备 51010702000173号