《四川动物》

文章标题:四川白鹅CD4基因胞外去信号肽区的可溶性表达及纯化

文章作者:程蓓蓓1, 陈舜1,2,3*, 汪铭书1,2,3, 程安春1,2,3
关 键 字:四川白鹅;CD4;原核表达;可溶性蛋白
文章摘要:根据GenBank公布的四川白鹅T细胞表面分子CD4基因序列设计特异性引物,扩增其胞外去信号肽区基因,将其构建成原核重组表达质粒goCD4-pET-32a(+),并在大肠杆菌原核表达系统中进行可溶性表达并纯化,为进一步应用与研究提供基础。通过从成年四川白鹅胸腺组织中提取RNA,经反转录合成cDNA为模板扩增CD4基因胞外去信号肽区,并构建原核表达载体goCD4-pET-32a(+)。在大肠杆菌Rosetta (DE3) pLysS系统中进行原核表达,通过改变表达温度、培养基、诱导剂IPTG浓度、诱导时间以及抗性浓度等条件,最终获得可溶性表达并经NI-NTA亲和层析获得纯化蛋白。结果显示,鹅CD4胞外区蛋白只有在16 ℃的TB培养基中目的蛋白his-goCD4可表达,鉴定结果与预期相符,诱导表达成功且多以不可溶的包涵体形式存在。研究发现改变IPTG浓度对表达产物存在形式影响较大,最终筛选出以0.4 mM的IPTG条件作为可溶性表达的最佳诱导浓度。NI-NTA亲和层析获得纯化蛋白并经Western-blot验证。